液相色譜柱後衍生(shēng)化法用于氨基甲酸酯類農藥的測定

液相色譜柱後衍生(shēng)化法用于氨基甲酸酯類農藥的測定

    提要研究了用液相色譜(HPLC)柱後衍生(shēng)化熒光檢測系統測定氨基甲酸酯類農藥的方法。用RadialPakC18柱在不同流動相梯度條件下對六種農藥和(hé)三種代謝産物進行(xíng)分離，通(tōng)過柱後衍生(shēng)化技(jì)術(shù)提高(gāo)熒光檢測器(qì)的靈敏度。結果表明(míng)：該方法分離效果良好，低(dī)檢測濃度為(wèi)2mg/l，小(xiǎo)檢出量為(wèi)2ng。

　　1、前言

　　氨基甲酸酯農藥種類多(duō)，用量大(dà)，需建立一種選擇性強而又靈敏、簡便的多(duō)殘留測定方法。常規的氣相及液相色譜測定法分别具有(yǒu)前處理(lǐ)繁瑣費時(shí)和(hé)檢測靈敏度不高(gāo)等問題，均難以适應對環境中微量殘留農藥快速分析的要求。本文研究的是應用HPLC柱後衍生(shēng)化熒光檢測系統進行(xíng)測定的方法。該方法國外已有(yǒu)一些(xiē)研究，而國內(nèi)尚未見報道(dào)。

　　本方法的建立是基于氨基甲酸酯類農藥在結構上(shàng)均帶有(yǒu)甲胺基團(-NHCH3)，在堿液作(zuò)用下都可(kě)水(shuǐ)解産生(shēng)甲胺這一特性。在HPLC的色譜柱與檢測器(qì)間(jiān)加一柱後反應裝置，農藥及其代謝物先經徑向加壓柱分離，再在裝置內(nèi)堿解産生(shēng)甲胺，甲胺與衍生(shēng)化試劑反應可(kě)生(shēng)成一種強熒光物質1-(2-羟乙基)硫基-2-甲基異吲哚，用高(gāo)靈敏的熒光檢測器(qì)進行(xíng)檢測即可(kě)。其反應式如下面所示。

　　2、實驗部分

　　2.1 儀器(qì)與試劑

　　儀器(qì)：德世AGR1100液相色譜儀+熒光檢測器(qì)， 自動梯度控制(zhì)器(qì)，1100高(gāo)壓恒流泵，S3100進樣器(qì)，色譜工作(zuò)站(zhàn)以及溫度控制(zhì)器(qì)、柱後反應裝置、Z型徑向加壓器(qì)，柱為(wèi)RadialPakmBondaPakC18徑向加壓柱。

　　試劑氧氫化鈉，優級純；四硼酸鈉、鄰苯二甲醛(OPTA)，分析純；巯基乙醇(MERC)，化學純；甲醇，分析純，重蒸過濾；超純水(shuǐ)，過濾備用。

　　農藥标樣涕滅威，涕滅威砜，涕滅威亞砜，呋喃丹，3-OH呋喃丹，西維因，速滅威，葉蟬散，巴沙等。

　　2.2 試驗方法

　　2.2.1 試液配制(zhì)

　　OPTA-MERC稱19.1g四硼酸鈉溶于約800ml超純水(shuǐ)中，另稱0.1g鄰苯二甲醛溶于10ml甲醇中。緩慢将鄰苯二甲醛溶液滴加到硼砂溶液中，邊加邊搖動。在通(tōng)風櫥內(nèi)加50mL巯基乙醇于混合液中，搖勻後用超純水(shuǐ)稀釋到1000ml，使四硼酸鈉溶液濃度為(wèi)0.05mol/L。用0.45mm濾膜過濾，冰箱保存備用。

　　NaOH溶液稱2.0gNaOH溶于1000ml超純水(shuǐ)中，使其濃度為(wèi)0.05mol/L。用0.45mm濾膜過濾備用。農藥标準液準确稱取0.01g各種農藥純品分别置于100ml容量瓶中，其中涕滅威、涕滅威砜、涕滅威亞砜、呋喃丹、3-OH呋喃丹和(hé)速滅威用超純水(shuǐ)溶解定容，西維因、葉蟬散、巴沙用甲醇定容，使各農藥溶液的濃度為(wèi)100mg/L。再分别用超純水(shuǐ)稀釋成一定濃度直接進樣測定(環境水(shuǐ)樣用0.45mm濾膜過濾後直接進樣測定。該濾膜具有(yǒu)濾速快、不易吸附的特點，樣品過濾後濃度不變)。

　　2.2.2 分析條件

　　流動相：甲醇-水(shuǐ)，流速1ml/min；OPTA-MERC、NaOH泵流速均為(wèi)0.5ml/min；熒光檢測器(qì)Excitation338nm，Emission455NM，靈敏度1/64；柱後反應溫度95±0.2℃；記錄儀紙速0.5cm/min；用外标法定量，進樣量1ml。

　　3、結果和(hé)討(tǎo)論

　　3.1 農藥的分離及反應條件的選擇

　　按照上(shàng)述儀器(qì)條件，對流動相進行(xíng)了選擇。用甲醇/水(shuǐ)固定比例的流動相進行(xíng)分離時(shí)，六種農藥和(hé)三種代謝物在RadialPakiC18柱上(shàng)得(de)不到很(hěn)好的分離，而用甲醇-水(shuǐ)以一定程序進行(xíng)梯度洗脫後得(de)到了較好的分離效果。在此基礎上(shàng)若将其中的甲醇改為(wèi)甲醇：乙腈=80：20(V/V)的混合液後再與水(shuǐ)進行(xíng)梯度淋洗，則分離效果更好，涕滅威的兩個(gè)代謝産物可(kě)得(de)到*分離。

　　本試驗中衍生(shēng)化試劑OPTA-METC及NaOH的濃度對檢測也有(yǒu)較大(dà)影(yǐng)響。适宜的濃度：OPTA為(wèi)0.1-0.2g/L，MERC為(wèi)50mL/L，NaOH為(wèi)0.05mol/L。濃度過高(gāo)不僅不能增加靈敏度，反而會(huì)使背景噪音(yīn)加大(dà)而幹擾測定。試劑配制(zhì)後的使用期均不宜超過一周。

　　3.2 方法的靈敏度與線性關系

　　在上(shàng)述試驗條件下，本方法的低(dī)檢出濃度為(wèi)2mg/L，低(dī)檢出量為(wèi)2ng。圖3為(wèi)進樣量1ml時(shí)農藥的低(dī)檢測圖譜。

　　将供試農藥标液分别用超純水(shuǐ)稀釋成2、4、6、8、10、12mg/L的溶液，測得(de)的标準曲線線性關系均良好。

　　3.3 土壤中氨基甲酸酯農藥的測定

　　分别稱取風幹、過20目篩的土樣10g，添加一定濃度的農藥标液，加10ml超純水(shuǐ)振蕩提取，離心，取上(shàng)清液用0.45mm濾膜過濾後進樣測定。每種濃度做(zuò)三組平行(xíng)試驗，結果涕滅威、涕滅威砜和(hé)呋喃丹同樣得(de)到很(hěn)好的分離。回收率為(wèi)84.0-96.2%。

　　4、結論

　　以上(shàng)試驗表明(míng)，用HPLC柱後衍生(shēng)化法測定多(duō)殘留的氨基甲酸酯農藥具有(yǒu)簡便、快速、靈敏的特點，尤其适用于地下水(shuǐ)和(hé)地表水(shuǐ)中微量農藥的檢測。由于該方法的進樣量較大(dà)，易造成色譜柱污染堵塞，因此在實際檢測時(shí)在柱前加一預保護柱以延長柱的使用壽命。