2015版藥典關于蜂蜜相關測定的液相色譜解決方案

為(wèi)了對應2015版藥典——蜂蜜相關測定，德世科技(jì)為(wèi)您解析液相色譜法檢測蜂蜜中各種成分的方法所用儀器(qì)耗材。可(kě)以幫助廣大(dà)藥物分析者特别是各藥檢所中藥室、中藥企業解決在分析檢測蜂蜜中遇到的問題。

   2015 版《中國藥典》一部中規定了蜂蜜中寡糖、5-羟甲基糠醛、及營養成分果糖、葡萄糖的測定。對餘這三項的測定說明(míng)如下：

一  寡糖的測定--目前市場(chǎng)出現的假蜂蜜中常添加大(dà)量糖漿，含有(yǒu)較多(duō)寡糖成分。通(tōng)過檢測蜂蜜樣品是否出現寡糖，能快速鑒定摻假蜂蜜。藥典規定寡糖的測定采用薄層色譜法，前處理(lǐ)需要用一種特殊的固相萃取小(xiǎo)柱，德世科技(jì)現已可(kě)為(wèi)客戶提供成品固相萃取小(xiǎo)柱5010-SPE6252-AC SpecialSPE Column Oligosaccharides in honey，200mg 矽藻土/500mg 活性碳/200mg 矽藻土/6ml，30/p，*藥典要求。

二  5-羟甲基糠醛--羟甲基糠醛是衡量蜂蜜新鮮度的一項重要指标，其含量越少(shǎo)，表明(míng)蜂蜜越新鮮。蜂蜜貯存和(hé)加工過程中溫度越高(gāo)，時(shí)間(jiān)越長，産生(shēng)的羟甲基糠醛就越多(duō)，它的含量高(gāo)，标志(zhì)蜂蜜貯存環境或加工工藝不合理(lǐ)，或者蜂蜜中有(yǒu)摻假。 5-羟甲基糠醛極性較大(dà)，适合用液相色譜柱 5020-89731 InertSustain AQ-C18 5um，4.6*250mm 分析。

三  果糖、葡萄糖—為(wèi)蜂蜜中的營養成分。藥典中推薦使用Prevail Carbohyrate ES 色譜柱，此為(wèi)聚合物基質氨基液相色譜柱

2015 版藥典中對以上(shàng)三項規定的測定方法如下：

 【檢查】

寡糖

取本品2g，置燒杯中，加入10ml 水(shuǐ)溶解後，緩緩加至活性炭固相萃取柱（在固相萃取空(kōng)柱管底部**一個(gè)篩闆，壓緊，置固相萃取裝置上(shàng)。稱取矽藻土0.2g，加水(shuǐ)适量混勻，用吸管加至固相萃取柱管中，自然沉降形成3μm 厚的矽藻土層，打開(kāi)真空(kōng)泵吸引，稱取活性炭0.5g 加10ml 水(shuǐ)攪拌，混勻，用吸管加入，在真空(kōng)泵的吸引下使活性炭沉降，當水(shuǐ)面接近活性炭層面時(shí)，再次注入0.2g 用水(shuǐ)混勻的矽藻土（蜂蜜中寡糖測定固相萃取小(xiǎo)柱：5010-SPE6252-ACSpecial SPE Column Oligosaccharides in honey，200mg 矽藻土/500mg 活性碳/200mg 矽藻土/6ml，30/p），在真空(kōng)泵的吸引下，以1 秒(miǎo)/滴的速度用25ml的水(shuǐ)預洗，當液面到達柱面上(shàng)2μm 時(shí)關掉**，再壓入上(shàng)篩闆，備用）中，打開(kāi)**，在真空(kōng)泵的吸引下，使

溶液通(tōng)過柱子，待液面下降到柱面以上(shàng)2μm 時(shí)，用7%乙醇25ml 洗脫，棄去洗脫液。再用50%乙醇l0ml 洗脫，收集洗脫液，置65℃水(shuǐ)浴中減壓濃縮至幹，殘渣加30%乙醇1ml 使溶解，作(zuò)為(wèi)供試品溶液。另取麥芽五糖對照品，加30%乙醇制(zhì)成每1ml 含1mg 的溶液，作(zuò)為(wèi)對照品溶液。照薄層色譜法（通(tōng)則0512）試驗，吸取供試品溶液與對照品溶液各3ml，分别點于同一矽膠G 薄層闆上(shàng)，以正丙醇-水(shuǐ)-三乙胺（60：30：0.7）為(wèi)展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾幹，噴以苯胺-二苯胺-磷酸的混合溶液（取二苯胺1g，苯胺1ml，磷酸5ml，加丙醇至50ml，混勻），加熱至斑點顯色清晰，在日光下檢視(shì)。供試品色譜中，在與對照品相應位置的下方，應不得(de)顯斑點。

 5-羟甲基糠醛 照液相色譜法（通(tōng)則0512）測定。

色譜條件與系統适用性試驗 以十八烷基矽烷鍵合矽膠為(wèi)填充劑（液相色譜柱：5020-89731 InertSustainAQ-C18 5um，4.6*250mm）；以乙腈-0.1%甲酸溶液（5：95）為(wèi)流動相；5-羟甲基糠醛檢測波長為(wèi)284nm，鳥苷檢測波長為(wèi)254nm。理(lǐ)論闆數(shù)按鳥苷峰計(jì)算(suàn)應不低(dī)于3000。對照品溶液的制(zhì)備 取鳥苷對照品适量，精密稱定，加10%甲醇制(zhì)成每1ml 含鳥苷0.2mg 的溶液，即得(de)。另取5-羟甲基糠醛對照品适量，加10%甲醇制(zhì)成每1ml 含4μg 的溶液，作(zuò)為(wèi)定位用。供試品溶液的制(zhì)備 取本品1g，置燒杯中，精密稱定，加10%甲醇适量溶解，并分次轉移至50ml 量瓶中，精密加入鳥苷對照品溶液1ml，加10%甲醇至刻度，搖勻，即得(de)。測定法精密吸取供試品溶液10μl，注入液相色譜儀，測定；另取鳥苷對照品溶液，5-羟甲基糠醛對照品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，用以确定供試品色譜中5-羟甲基糠醛及鳥苷的色譜峰；以鳥苷對照品計(jì)算(suàn)含量并乘以校(xiào)正因子0.340 進行(xíng)校(xiào)正，即得(de)。本品含5-羟甲基糠醛，不得(de)過0.004%。蔗糖和(hé)麥芽糖照〔含量測定〕項下方法測定，分别計(jì)算(suàn)含量。本品含蔗糖和(hé)麥芽糖分别不得(de)過5.0%。

液相色譜儀配置

P230II梯度HPLC系統     北京德世科技(jì)

單系統基本配置：

⑴ P230II高(gāo)壓恒流輸液泵

⑵ UV230II型紫外可(kě)變波長檢測器(qì)

⑶ Rheodyne 7725i 高(gāo)壓六通(tōng)進樣閥

⑷ ZJ-1閥及色譜柱支架

⑸ TD-1-15梯度混合器(qì)

⑺ EC2006色譜處理(lǐ)系統軟件（不含打印機、計(jì)算(suàn)機）

⑻ P230II梯度系統啓動包

 【果糖、葡萄糖含量測定】照液相色譜法（通(tōng)則0512）測定。

色譜條件與系統适用性試驗 以Prevail Carbohyrate ES（聚合物基質液相色譜柱：SHO-F7630001 Asahipak NH2P-50 4E 250MMx4.6MM）為(wèi)色譜柱，以乙腈-水(shuǐ)（75：25）為(wèi)流動相；示差折光檢測器(qì)檢測。理(lǐ)論闆數(shù)按果糖峰計(jì)算(suàn)應不低(dī)于2000。标準曲線的制(zhì)備 分别精密稱取果糖對照品1.0g，葡萄糖對照品0.8g，置同一具塞錐形瓶中，精密加入40%乙腈20ml，溶解，搖勻，作(zuò)為(wèi)果糖、葡萄糖對照品儲備液。另精密稱取蔗糖對照品0.2g，麥芽糖對照品0.2g，置同一具塞錐形瓶中，精密加入40%乙腈10ml，溶解，搖勻，作(zuò)為(wèi)蔗糖、麥芽糖對照品儲備液。分别精密量取果糖、葡萄糖對照品儲備液和(hé)蔗糖、麥芽糖對照品儲備液，加40%乙腈配成不同濃度的果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖混合對照品溶液。每一濃度溶液配制(zhì)中，儲備液的用量和(hé)稀釋體(tǐ)積見2015 版藥典P360。精密吸取混合對照品溶液各15μl，注入液相色譜儀，分别測定。以對照品濃度為(wèi)橫坐(zuò)标，以峰面積值為(wèi)縱

坐(zuò)标，繪制(zhì)标準曲線，計(jì)算(suàn)回歸方程。供試品溶液的制(zhì)備 取本品約1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入40%乙腈20ml，溶解，搖勻，濾過，取續濾液，即得(de)。

測定法 精密量取供試品溶液15μl，注入液相色譜儀，測定，按标準曲線法計(jì)算(suàn)含量。

本品含果糖（C6H12O6）和(hé)葡萄糖（C6H12O6）的總量不得(de)少(shǎo)于60.0%，果糖與葡萄糖含量比值不得(de)小(xiǎo)于1.0。

液相色譜儀配置 

P230II高(gāo)壓恒流泵      北京德世科技(jì)

1） 雙柱塞往複串聯泵

2） 流量範圍：0.001mL/min-9.999mL/min, 設定步長：0.001mL/min

3） 流量準确度：≤±0.3% (1.000ml/min, H2O,室溫,8.5MPa)

4） 流量穩定性：RSD≤0.1% (1.000ml/min, H2O,室溫,8.5MPa)

5） 高(gāo)工作(zuò)壓力：42MPa(0.001mL/min—5.000mL/min)

20MPa(5.001mL/min—9.999mL/min)

6） 顯示壓力誤差：≤±3.0%

7） 壓力脈動：≤1.0%

8） 電(diàn)源：AC 110V/220V, 50Hz/60Hz

9） 功耗：180W

10） 外形尺寸（長×寬×高(gāo)）：420mm×280mm×175mm

11） 流量準确度校(xiào)正

12） 內(nèi)外控互換模式

13） Psi,Mpa,bar壓力單位顯示任選

RI-201H示差折光檢測器(qì)（*）

Rheodyne7725i高(gāo)壓進樣閥

A/D适配器(qì)

ZJ-1閥及色譜柱安裝支架

P230配RI-201H示差折光檢測器(qì)啓動包

所用耗材

北京薇町蘭德科技有限公司  提供2015版藥典 蜂蜜檢測液相色譜 儀器(qì)設備及耗材相關産品